Tinción de Gram

La tinción de gram aplica una secuencia de tinciones sobre las bacterias, permitiendo crear colores que las distinguen según su composición.

Las bacterias gram positivas consisten de dos capas:

• La más externa es una pared gruesa de peptidoglicano (azúcares y aminoácidos).
• La pared más interna es una delgada membrana plasmática (bicapa fosfolipídica).

Las bacterias gram negativas consisten de tres capas:

• La más externa es una membrana externa conformada por lipopolisacáridos y proteínas.
• La capa intermedia es una pared delgada de peptidoglicano.
• La capa más interna es una membrana plasmática.

Combinación de Morfología y Gram

La combinación de cocos, bacilos, gram positivo y gram negativo produce 4 grandes grupos, y tres casos especiales: 

• Cocos gram positivos:
  • En racimos: Staphylococcus 
  • En cadenas o pares: Streptococcus, Enterococcus, Peptostreptococcus.

• Bacilos gram negativos:
  • E.coli
  • Proteus
  • Klebsiella
  • Serratia
  • Shigella
  • Salmonella
  • Yersinia
  • Pseudomonas
  • Stenotrophomonas
  • Bacteroides

• Cocos gram negativos:
  • Neisseria
  • Moraxella
    
• Bacilos gram positivos:
  • Clostridium
  • Actinomyces

Excepciones:

• Cocobacilo gram positivo:
  • Listeria (puede también ser un BGP)
    
• Cocobacilo gram negativo:
  • Haemophilus
  • Legionella
  • Bordetella
    
• Cocobacilo gram variable:
  • Acinetobacter

Test de Coagulasa – Staphylococcus

La coagulasa es una enzima producida por algunas bacterias que convierte el fibrinógeno a fibrina. Su presencia permite diferenciar los staphylococcus.

• Coagulasa positivo: S. aureus y S. intermedius.
• Coagulasa negativo: S. epidermidis, S. capitis, S. lugdunensis, S. saprophyticus.

Esta distinción es importante porque los coagulasa negativos no siempre son patológicos y pueden ser contaminantes.

Test de Hemólisis – Streptococcus

La capacidad de hemolizar glóbulos rojos distingue a los Streptococcus, lo que se estudia en un medio conocido como Agar Sangre, que contiene sangre de oveja o caballo.

Las posibilidades para un Streptococcus son:

• Alfa hemolítico: producen una hemólisis parcial, oxidando la hemoglobina creando methemoglobina, que genera descoloración verde-café en las colonias.
  • S. pneumoniae.
  • S. viridans
    
• Beta hemolítico: produce hemólisis completa.
  • S. pyogenes.
  • S. agalactiae
    
• Gamma hemolítico: no producen hemólisis.
  • S. bovis
  • Enterococcus (se consideraban parte de los Streptococcus hasta los años 70).

Serotipos de Lancefield – Streptococcus

Distinguen especies de Streptococcus basado en carbohidratos de superficie.

• Grupo A: S. pyogenes (Beta hemolítico).
• Grupo B: S. agalactiae (Beta hemolítico).
• Grupo D: Enterococcus, S. bovis (Gamma hemolítico).
• No Lancefield: S. pneumoniae, S. viridans (Alfa hemolíticos).

Test de Fermentación de Lactosa – BGN

La capacidad de fermentar lactosa es un diferenciador importante en los bacilos gram negativos. Se estudia cultivando las bacterias en un medio llamado Agar MacConkey.

• Fermentadores de Lactosa:
  • E. Coli
  • Klebsiella
  • Enterobacter
    
• No Fermentadores de Lactosa:
  • Pseudomonas
  • Proteus
  • H. Influenzae
  • Salmonella
  • Shigella
  • Stenotrophomonas
  • Acinetobacter
    
• Fermentadores lentos:
  • Citrobacter
  • Serratia

Otros – Enterococcus

Antiguamente conocidos como Streptococcus grupo D hasta fines de los 70.

Existen dos tipos de Enterococcus clínicamente relevantes:

• E. faecalis, que produce la mayoría de las infecciones por enterococcus. Tiene un menor grado de resistencia a Ampicilina, Vancomicina y Aminoglicósidos.
• E. faecium, produce una porción menor de las infecciones por enterococcus, sin embargo tiene un mayor grado de resistencia a Ampicilina, Vancomicina y Aminoglicósidos.

Por lo tanto, es importante “ponerle apellido” a esta bacteria, y no referirse genéricamente a ella como “enterococo”.

Otros – Anaerobios

Este término hace referencia a todas las bacterias que crecen y se reproducen en medios donde no hay oxígeno.

Se encuentran principalmente en el tracto gastrointestinal y cavidad oral.

Si bien estas bacterias tiñen en el gram y tienen morfologías reconocibles, es raro que se les llame por esas caracteristicas y normalmente se les llama “anaerobias”:

• Clostridium (genérico, las spp).
• Bacteroides
• Peptostreptococcus.
• Actinomyces.

Otros – Bacterias Atípicas

Este es un término inexacto para referirse a bacterias inusuales en términos de su estructura celular, morfología y/o ciclo celular.

Ejemplos incluyen:

• Mycoplasma: no tiene pared celular, son pleomórficas.
• Chlamydia: no tiene peptidoglicano en su pared celular, tienen un ciclo vital en varias fases y son parásitos intracelulares obligados (no pueden producir su propio ATP).
• Rickettsia: parásitos intracelulares obligados, requieren vectores artrópodos.
• Legionella: no crecen en cultivos tradicionales. Si bien universalmente no se incluyen en la categoría de atípicos, su manifestación más común es la neumonía atípica, y su tratamiento antibiótico es el mismo que los otros atípicos.

Otros – Enterobacteriaceae

Concepto que representa una familia de bacterias gram negativas, también llamadas BGN entéricos o “entéricos”.

Es un término que genera confusión, ya que hay varios BNG que viven en el tracto GI y que no son parte de la familia.

Ejemplos incluyen:

• Citrobacter
• Enterobacter
• E. Coli
• Klebsiella
• Morganella
• Proteus
• Salmonella
• Serratia
• Shigella
• Yersinia

Otros – Patrones de Resistencia

• SAMR v/s SAMS: Staphylococcus aureus según su resistencia a Meticilina.
• ERV: Enterococco resistente a Vancomicina.
• BLEE: Cualquier miembro de las Enterobacteriaceas que produce una enzima llamada Betalactamasa de Expectro Extendido.